Lọ Lem 2 Giờ Sáng kể về Ha Yun Seo (Shin Hyun Been thủ vai), một người phụ nữ đã cống hiến cả cuộc đời cho công việc. Sau khi một mình nuôi nấng em trai, cô hiện đang giữ vị trí quản lý marketing tại một công ty thẻ tín dụng. Cuộc sống của cô đột ngột rẽ hướng khi phát hiện ra rằng bạn trai mình, Seo Ju Won (Moon Sang Min thủ vai), chính là người thừa kế của gia đình sở hữu công ty này. Khi biết được mối quan hệ giữa hai người, mẹ của Ju Won đã đề nghị trả tiền để Yun Seo chấm dứt tình yêu với con trai bà, và cô đã đồng ý. Tuy nhiên, Ju Won không dễ dàng từ bỏ và quyết tâm giành lại trái tim của Yun Seo. Liệu cả hai có thể vượt qua những thử thách để có được hạnh phúc, hay thực tế sẽ đẩy họ xa nhau?